色譜柱是液相色譜儀的重要組成部分,對(duì)液相色譜柱的正確使用不僅能延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命,還能有效保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
色譜柱正確及時(shí)的沖洗非常有必要:
1、加裝保護(hù)柱。保護(hù)柱的作用是過(guò)濾掉來(lái)自流動(dòng)相和樣品的化學(xué)“拉圾也可以有效除去”同時(shí)流動(dòng)相中的不溶物。盡管液相色譜儀在流動(dòng)相吸入口和進(jìn)樣閥后部都裝有不同孔徑的濾器,但濾器只能除去不溶性顆粒而不能除去化學(xué)污然,加裝保護(hù)柱,特別是在分析中藥、中成藥等復(fù)雜混合物和生物樣品時(shí)*。
2、過(guò)濾流動(dòng)相和樣品。流動(dòng)相通常由水或緩沖溶液與有機(jī)溶劑混合而成,當(dāng)流動(dòng)相中含有緩沖鹽時(shí),色譜柱的流動(dòng)相應(yīng)過(guò)濾。要注意區(qū)分水系和油系,二者不可混用。裝流動(dòng)相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線濾器要定期清洗和更換。
3、凈化樣品。當(dāng)樣品中含有對(duì)色譜柱有損害的化學(xué)成分,如產(chǎn)生吸附的蛋白質(zhì)、糖等有機(jī)分子和強(qiáng)吸附性物質(zhì)等,在進(jìn)樣前應(yīng)盡可能對(duì)樣品進(jìn)行分離提純以除去多余雜質(zhì)組分。
4、避免液相色譜柱過(guò)高的柱壓。雖然液相色譜柱能耐受的壓力大,但過(guò)高及過(guò)大的壓力變化均會(huì)縮短色譜柱的壽命,所以要注意避免過(guò)高的柱壓。
5、注意溫度和酸堿度。一般以硅膠為基質(zhì)的色譜柱zui高使用溫度不超過(guò)60℃,以低于40℃為宜,特別是在流動(dòng)相pH接近使用限度時(shí),更應(yīng)降低使用溫度。溫度過(guò)高會(huì)加快鍵合相的水解和硅膠的溶解,從而使填料性質(zhì)改變,柱床塌陷,降低柱效改變峰形。若需要在的pH條件下使用時(shí),可通過(guò)在泵和進(jìn)樣閥之間加裝預(yù)柱或降低使用溫度的方法來(lái)避免液相色譜儀的色譜柱損害。
6、對(duì)液相色譜柱正確及時(shí)的沖洗。開(kāi)始試驗(yàn)前,應(yīng)了解柱中當(dāng)前是何種溶劑。柱中當(dāng)前溶劑一定要與分析樣品所用流動(dòng)相互溶,如不能混溶要用與二者均能相互混溶的第三種溶劑過(guò)渡,使用時(shí)應(yīng)給予注意。